Wpływ tranilastu na poziom mRNA MMP-2 i MMP-9 w fibroblastach prawidłowych i keloidowych

Wprowadzenie
Tranilast (kwas N-(3',4'-demetoksycynamoilo)-antranilowy) należy do leków przeciwalergicznych. Jego mechanizm działania polega na hamowaniu indukowanego antygenowo uwalniania mediatorów chemicznych przez mastocyty i bazofile. Ma także działanie antyfibroproliferacyjne. Te właściwości tranilastu są wykorzystywane w leczeniu blizn przerostowych i keloidów. Fibroblasty pochodzące z keloidów charakteryzują się nadmiernym wytwarzaniem kolagenu typu I oraz ograniczonym rozkładem macierzy pozakomórkowej w porównaniu z fibroblastami prawidłowymi. Metaloproteinazy odgrywają istotną rolę w przemianach macierzy pozakomórkowej.

Cel pracy
Ilościowa ocena ekspresji genów MMP-2 (żelatynazy A) i MMP-9 (żelatynazy B) w prawidłowych ludzkich fibroblastach skóry oraz fibroblastach pochodzących z keloidów poddanych działaniu tranilastu w warunkach in vitro.

Materiał i metodyka
Materiał eksperymentalny stanowiły dwie linie komórkowe: prawidłowe fibroblasty skóry ludzkiej (NHDF) oraz fibroblasty keloidowe (KEL FIB). W pierwszym etapie oceniano wpływ tranilastu na żywotność komórek. Drugi etap badań obejmował ilościową ocenę ekspresji genów MMP-2 i MMP-9 w ekstraktach RNA z fibroblastów poddanych działaniu tranilastu. Do oceny poziomu transkrypcji genów MMP-2 i MMP-9 w komórkach linii NHDF i KEL FIB po zastosowaniu tranilastu wykorzystano metodę real-time QRT-PCR.

Wyniki
Tranilast w stężeniu 300 μM zmniejsza żywotność fibroblastów obu linii komórkowych. Wykonana analiza wskazuje na stymulujący wpływ tranilastu w stężeniach 3 μM i 30 μM na ekspresję MMP-2 w fibroblastach prawidłowych, a w stężeniu 3 μM w fibroblastach keloidowych. Tranilast nie wpływał natomiast na ekspresję mRNA MMP-9 ani w fibroblastach prawidłowych, ani keloidowych.

Wnioski
Tranilast hamuje przeżywalność fibroblastów prawidłowych i keloidowych oraz wpływa na ekspresję MMP-2. Aktywność leku zależy od zastosowanego stężenia. Konieczne są dalsze badania w celu poznania mechanizmu działania antyproliferacyjnego tranilastu.



Introduction
Tranilast (N-(3’,4’-demethoxycinnamoyl)-anthranilic acid) is an anti-allergic drug. Its mechanism of action is based on the inhibition of antigen-induced release of chemical mediators from mast cells and basophils. It exerts antifibroproliferative activity as well. These properties of tranilast are used in the treatment of hypertrophic scars and keloids. Keloid fibroblasts exhibit overproduction of collagen type I and decreased degradation of extracellular matrix in comparison with normal fibroblasts. Matrix metalloproteinases play the key role in extracellular matrix turnover.

Objective
Quantitatively evaluate MMP-2 (gelatinase A) and MMP-9 (gelatinase B) gene expression in normal human skin fibroblasts and fibroblasts derived from keloids exposed to tranilast in vitro.

Material and methods
The experimental material constituted two cell lines: normal human dermal fibroblasts (NHDF) and keloid fibroblasts (KEL FIB). In the first stage of the study, the influence of tranilast on cell viability was estimated. The second stage of the study involved the quantitative evaluation of MMP-2 and MMP-9 gene expression in RNA extracts from fibroblasts treated with tranilast. Real-time QRT-PCR was used to validate the transcription level of MMP-2 and MMP-9 genes in NHDF and KEL FIB cells after tranilast treatment.

Results
Tranilast reduces the viability of the fibroblasts of both cell lines in 300 μM. The performed analysis indicates a stimulating effect of tranilast at 3 μM and 30 μM on the expression of MMP-2 in normal fibroblasts and at 3 μM on keloid fibroblasts. Tranilast did not influence the expression of MMP-9 mRNA, either in normal fibroblasts or in keloid fibroblasts.

Conclusions
Tranislast reduces the viability of normal and keloid fibroblast and modulated expression of MMP-2. Hovewer its activity is dose dependent. It is necessary to continue the study to evaluate full antiproliferative activity of tranilast.