Zaburzenia homeostazy reaktywnych form tlenu w klasycznym chłoniaku Hodgkina
Autor: Małgosia Michalak
Data: 16.04.2014
Źródło: contemporary oncology
Oksydaza NADPH jest kompleksem złożonym z pięciu białek kodowanych przez geny CYBA, CYBB, NCF1, NCF2 oraz NCF4. Enzym zlokalizowany jest w błonie komórkowej fagocytów, gdzie bierze udział w wybuchu tlenowym, podczas którego wytwarzany jest anionorodnik ponadtlenkowy o właściwościach bakteriobójczych. Mutacje któregokolwiek z genów kodujących oksydazę NADPH wywołują prze- wlekłą chorobę ziarniniakową cechującą się nawracającymi zakażeniami bakteryjnymi, a także zwiększoną predyspozycją do chorób nowotworowych. Oksydaza NADPH występuje również w innych typach komórek, w tym w limfocytach typu B, w których wytwarzane reaktywne formy tlenu pełnią funkcję cząsteczek sygnałowych zaangażowanych w takie procesy komórkowe, jak różnicowanie czy proliferacja.
Celem badań była identyfikacja uszkodzeń genów kodujących oksydazę NADPH w klasycznym chłoniaku Hodgkina oraz analiza ich wpływu na enzym.
W celu identyfikacji potencjalnych uszkodzeń badanych genów wykorzystaliśmy wyniki z mikromacierzy oraz technikę FICTION (zmiany liczby kopii DNA), sekwencjonowanie, analizę kodowanych białek (Western blot, immunofenotypowanie), a także analizę poziomu metylacji badanych genów za pomocą mikromacierzy Infinium. Przeprowadziliśmy także analizę funkcjonalną mającą na celu określenie ilości wytwarzanego anionorodnika ponadtlenkowego w liniach komórkowych klasycznego chłoniaka Hodgkina w porównaniu z liniami komórkowymi chłoniaków nieziarniczych.
Przeprowadzone badania wykazały częste delecje genu CYBB zarówno w liniach komórkowych (2 na 7 przypadków), jak i guzach pierwotnych (8 na 18 orzypadków) klasycznego chłoniaka Hodgkina, a także delecje pozostałych genów kodujących oksydazę NADPH. Wykazano ponadto zmiany epigenetyczne wyciszające gen NCF1 (5 z 5 badanych linii komórkowych). Analiza funkcjonalna potwierdziła natomiast utratę zdolności do wytwarzania anionorodnika ponadtlenkowego przez oksydazę NADPH we wszystkich siedmiu przebadanych liniach komórkowych klasycznego chłoniaka Hodgkina.
Przedstawione wyniki sugerują, że powtarzające się uszkodzenia genów kodujących oksydazę NADPH w klasycznym chłoniaku Hodgkina skutkują inaktywacją tego enzymu, co zaburza homeostazę reaktywnych form tlenu i tym samym prawdopodobnie przyczynia się do patogenezy tego chłoniaka.
W celu identyfikacji potencjalnych uszkodzeń badanych genów wykorzystaliśmy wyniki z mikromacierzy oraz technikę FICTION (zmiany liczby kopii DNA), sekwencjonowanie, analizę kodowanych białek (Western blot, immunofenotypowanie), a także analizę poziomu metylacji badanych genów za pomocą mikromacierzy Infinium. Przeprowadziliśmy także analizę funkcjonalną mającą na celu określenie ilości wytwarzanego anionorodnika ponadtlenkowego w liniach komórkowych klasycznego chłoniaka Hodgkina w porównaniu z liniami komórkowymi chłoniaków nieziarniczych.
Przeprowadzone badania wykazały częste delecje genu CYBB zarówno w liniach komórkowych (2 na 7 przypadków), jak i guzach pierwotnych (8 na 18 orzypadków) klasycznego chłoniaka Hodgkina, a także delecje pozostałych genów kodujących oksydazę NADPH. Wykazano ponadto zmiany epigenetyczne wyciszające gen NCF1 (5 z 5 badanych linii komórkowych). Analiza funkcjonalna potwierdziła natomiast utratę zdolności do wytwarzania anionorodnika ponadtlenkowego przez oksydazę NADPH we wszystkich siedmiu przebadanych liniach komórkowych klasycznego chłoniaka Hodgkina.
Przedstawione wyniki sugerują, że powtarzające się uszkodzenia genów kodujących oksydazę NADPH w klasycznym chłoniaku Hodgkina skutkują inaktywacją tego enzymu, co zaburza homeostazę reaktywnych form tlenu i tym samym prawdopodobnie przyczynia się do patogenezy tego chłoniaka.
